基本的考慮因素。由于吸光度法技術(shù)上簡(jiǎn)單可靠,所用儀器價(jià)格合理,因此是目前酶活 測(cè)定中首選的方法之一。 當(dāng)?shù)孜锘虍a(chǎn)物是有顏色的,或者是在紫外區(qū)有光吸收的,吸光度法就可以非??焖俸头?nbsp;便地進(jìn)行,因?yàn)槲猱a(chǎn)物的出現(xiàn)速率或者消失速率可以用分光光度法來(lái)跟蹤檢測(cè)。 催化活性z 對(duì)應(yīng)于每分鐘的吸光度的變化為: z=(△AV³100)/ε d△t 式中,V 是測(cè)量體積,L;t 是時(shí)間,min;z 的單位是mol/min,對(duì)英語(yǔ)前面章節(jié)里給出的國(guó) 際單位制U 的定義。
吸光光度法是基于物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收而建立起來(lái)的分析方法,包括比色法、可見(jiàn)及紫外吸光光度法及紅外光譜法。吸光光度法是采用分光器獲得純度較高的單色光,基于物質(zhì)對(duì)單色光的選擇性吸收測(cè)定物質(zhì)組分的分析方法。
吸光光度法的方法原理
吸光光度法是借助分光光度計(jì)測(cè)定溶液的吸光度,根據(jù)朗伯一比耳定律確定物質(zhì)溶液的濃度。吸光光度法是比較有色溶液對(duì)某一波長(zhǎng)光的吸收情況。
吸光光度法的特點(diǎn)
A靈敏度高
一般吸光光度法所測(cè)定的下限可達(dá)10-5~10-6mol/L,因而有較高的靈敏度,適用于微量組分的分析。
B準(zhǔn)確度較高
吸光光度法的相對(duì)誤差為2%~5%,采用精密的分光光度計(jì)測(cè)量,相對(duì)誤差為1%~2%,其準(zhǔn)確度雖不如滴定分析法高,但已滿(mǎn)足微量組分測(cè)定的準(zhǔn)確度要求,而對(duì)微量組分的測(cè)定,滴定分析法是難以進(jìn)行的。
C簡(jiǎn)便、快速
吸光光度法所使用的儀器——分光光度計(jì),操作簡(jiǎn)單,易于掌握。近年來(lái),由于一些靈敏度高、選擇性好的顯色劑和各種掩飾不斷出現(xiàn),常可不經(jīng)分離直接進(jìn)行吸光度分析,有效地簡(jiǎn)化了測(cè)量步驟,提高了分析速度。
D應(yīng)用廣泛
幾乎所有的無(wú)機(jī)物和許多有機(jī)化合物都可直接或間接地用吸光光度法進(jìn)行測(cè)定。從外,該法還可用來(lái)研究化學(xué)反應(yīng)的機(jī)理,以及溶液的化學(xué)平衡等理論。如測(cè)定配合物的組成,弱酸、弱堿的理解常數(shù)等。由于有機(jī)試劑和配位化學(xué)的迅速發(fā)展及分光光度計(jì)性能的提高。吸光光度法已廣泛用于生產(chǎn)和科研部門(mén)。
酶制劑相關(guān)產(chǎn)品
吸光度測(cè)定方法
1、單一組分的測(cè)定
①比較法。比較法是先配制與被測(cè)試液濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)溶液c(S)、被測(cè)試液c(X),在相同條件下顯色、定容后,測(cè)其相應(yīng)的吸光度為A和A(X),根據(jù)朗伯一比耳定律:
A(S)=ε(S)b(S)c(S) A(X)=ε(X)b(X)c(X)
由于同一物質(zhì),用同一波長(zhǎng)及相同厚度的吸收皿測(cè)定
ε(X)=ε(S) b(X)=b(S)
所以 A(S):A(X)=c(S):c(X)
即可求出待測(cè)試液的含量c(X)。
應(yīng)當(dāng)注意,進(jìn)行計(jì)算時(shí),只有當(dāng)與相近時(shí),結(jié)果才可靠,否則將有較大誤差
吸光光度法的特點(diǎn)是:因入射光是純度較高的單色光,故使偏離朗伯一比耳定律的情況大為減少,標(biāo)準(zhǔn)曲線直線部分的范圍更大,分析結(jié)果的準(zhǔn)確度較高。因可任意選取某種波長(zhǎng)的單色光,故利用吸光度的加和性,可同時(shí)測(cè)定溶液中兩種或兩種以上的組分。由于入射光的波長(zhǎng)范圍擴(kuò)大了,許多無(wú)色物質(zhì),只要它們?cè)谧贤饣蚣t外光區(qū)域內(nèi)有吸收峰,都可以用吸光光度法進(jìn)行測(cè)定。
②標(biāo)準(zhǔn)曲線法
2、高含量組分的測(cè)定——示差法
3、多組分的分析
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